Biotīna peptīdi

Kas ir biotinilēti peptīdi?

Biotinilēti peptīdi ir peptīdi, kas ir modificēti, lai iekļautu biotīna daļu. Šī modifikācija izmanto biotīna un avidīna vai streptavidīna augsto afinitātes mijiedarbību, ko plaši izmanto bioloģiskos un bioķīmiskos lietojumos. Biotīna molekula ir maza, stabila un būtiski nemaina peptīda struktūru vai funkciju, vienlaikus nodrošinot ļoti efektīvu uztveršanu vai noteikšanu, izmantojot sistēmas, kuru pamatā ir avidīns{3}}.

 

Ķīmiskā modifikācija
Biotīnu parasti ievada ar NHS-biotīna (N-hidroksisukcinimīda biotīna) reaģentu, kas reaģē ar primārajām amīnu grupām, kas atrodamas peptīda N-galā, vai lizīna atlikumiem, veidojot stabilu amīda saiti.

生物素(Biotīns） 肽（Peptīds）

COOH NH₂

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Aktivizācija） → 缩合（Savienojums）

↓ ↓

Biotīna-CONH-peptīds

 

Afinitātes mijiedarbība
Biotinilētais peptīds var spēcīgi (Kd ~10⁻¹⁵ M) saistīties ar avidīnu vai streptavidīnu, padarot to ideāli piemērotu lietošanai pārbaudēs, kurās nepieciešama precīza noteikšana, uztveršana vai imobilizācija.

Biotinilēto peptīdu sintēzes gadījumi

Peptīdu secība: biotīns-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Garums: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptīdu secība: biotīns-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Garums: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Biotinilēto peptīdu pielietojumi

Biotinilētie peptīdi ir daudzpusīgi rīki pētniecībā un rūpniecībā ar plašu pielietojumu klāstu, tostarp:

Afinitātes attīrīšana

Izmanto, lai attīrītu saistīšanās partnerus, piemēram, proteīnus, antivielas vai nukleīnskābes, imobilizējot biotinilēto peptīdu uz streptavidīna lodītēm.

ELISA un Western blotēšana

Biotinilētie peptīdi darbojas kā zondes, lai noteiktu specifisku mijiedarbību, ja tie tiek savienoti ar avidīna-HRP vai avidīna-fluorescējošām iezīmēm.

Virsmas plazmas rezonanse (SPR)

Izmanto peptīdu imobilizācijai uz biosensoru mikroshēmām mijiedarbības pētījumos.

Narkotiku atklāšana

Zāļu kandidātu skrīnings, analizējot to saistīšanos ar biotinilētu peptīdu mērķiem.

Imunoloģija

Biotinilētos peptīdus izmanto, lai kartētu epitopus, pētītu antigēnu -antivielu mijiedarbību un veiktu T-šūnu testus.

Epitopu kartēšana vakcīnas izstrādei

Pielāgots biotinilēts peptīds tika izmantots, lai identificētu vīrusa proteīna antigēnos epitopus, palīdzot izstrādāt vakcīnas kandidātu.

Olbaltumvielu{0}}olbaltumvielu mijiedarbības pētījumi

Biotinilēti peptīdi, kas imobilizēti uz streptavidīna-pārklātām plāksnēm, ļāva pētīt receptoru-ligandu mijiedarbību, atklājot saistīšanās afinitāti, kas ir būtiska zāļu izstrādei.

Imūntestu optimizācija

Diagnostikas testā biotinilēti peptīdi tika izmantoti kā antigēni, lai uzlabotu ELISA jutīgumu un specifiskumu slimības biomarķieru noteikšanai.

 

Atsauces

1. Grīns, NM (1975).Avidīns un streptavidīns.Biochemical Journal, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L. un Wolf, FJ (1964).Streptavidīna, biotīnu{0}}saistošā proteīna, ko ražo Streptomyces, īpašības.Bioķīmijas un biofizikas arhīvs, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM un Titus, G. (1994).Olbaltumvielu biotinilēšana pētniecībā un biotehnoloģijā.Anal Biochem, 218(1), 1-7.